금일 블로그 포스팅은 "Western Blot" 입니다. Western Blot. 단백질 면역 블롯이라고도 불리며  단백질에 대하여 정량, 정성 분석을 하는 실험으로 DNA를 검출하는 Southern blot, RNA를 검출하는 Northern blot과 더불어 많이 사용되는 단백질 검출 실험법입니다! 제가 하였던 실험에서는 LPS(Lipopolysaccharide)를 처리한 Raw 264.7 세포에서와 LPS를 처리하지 않은 Raw 264.7 세포에서의 단백질 발현량의 차이를 비교해 보는 실험을 진행하였습니다. ( ＊ LPS는 그람 음성 세균의 세포막을 형성하는 물질로서 세포에 내독소 물질로 작용하여 염증 반응을 유도하는, 면역반응 중 대식세포를 자극하는 물질입니다. 즉, 본 실험에 적용하자면 이론 상..

금일 블로그 포스팅은 "Cell counting" 입니다. Cell counting은 생명공학에서 가장 기초가 되는 측정입니다. Live cell과 Dead cell을 관찰함으로써 세포의 생존율을 추정할 수 있고, 실험에 사용되는 세포가 잘 유지되고 있는지 확인 할 수 있기에 실험의 결과를 분석함으로 세포 생존에 유리한 환경을 변화시켜줄 수 있다는 장점이 있기 때문입니다. 이번 실험에서는 세포 부유액 속 세포의 갯수를 세어 1ml당 세포의 수를 계산하는 Hemocytometer를 이용하여 live cell과 dead cell의 total cell의 갯수를 확인하는 방법으로 진행됩니다. 이때 dead cell과 live cell을 육안으로 구분하는 방법으로 Trypan Blue(이하 TB) 염색을 사용하여..

안녕하세요. 금일 포스팅은 "Quantification of DNA and Protein"입니다. 생명체의 네 가지 중요 분자들(고분자, Macromolecule)은 기본 단위(단량체, monomer)들이 중합체(polymer)를 이루어 형성됩니다. 1. 단당류(monosaccharide) -> 탄수화물(carbohydrate) 2. 아미노산(Amino acid) -> 단백질(protein) 3. 지질(Lipid) 4. Nucleotide -> 핵산(Nucleic acid): DNA(Deoxynucleic acid) & RNA(Ribonucleic acid) 이러한 생체분자들은 빛을 흡광 하는 성질이 있습니다. 이를 이용하여 생체 분자의 농도를 측정하는 것이 이번 실험의 목표입니다. 이번 실험에서는 DN..

금일 포스팅 할 주제는 바로 "Making Buffer solution"입니다. Buffer는 완충 용액으로도 부르며 일반적으로 산이나 염기를 가해도 그 용액의 pH가 크게 변하지 않는 용액을 의미합니다. 이는 pH를 일정하게 유지해야 하는 다양한 실험에서 사용합니다. 예컨대, 실험 중 용액 내의 pH가 급격하게 변하게 된다면, 실험에서 사용하는 Sample이 파괴되거나 변형이 될 수 있습니다. pH의 변화로 인해 실험이 실패하게 되는 것이죠. 때문에 Buffer solution을 이용하여 실험이 요구하는 pH값에 맞게 pKa 계산을 하고 그에 맞는 Buffer를 제작하여 사용하는 것입니다. 실험 설명에 앞서 간단하게 Introduction을 설명하고 시작하겠습니다. 용액(solution) - 둘 이상의..

금일 포스팅 할 생명과학실험의 실험 주제는 바로 "DNA purification" 입니다. 본 실험은 일반적인 DNA와 달리 supercoiled 형태를 가진 plasmid를 관찰하는것이 주 된 목표입니다. 그렇다면 왜? plasmid를 관찰하는 것일까요? 바로 plasmid는 벡터로 사용될 수 있고, 단백질을 발현하는 기능이 있기에 유전자 치료를 목적으로 사용될 수 있기 때문입니다. plasmid는 세균에서 분리하여 조작하기 쉽고, 세포 내로 쉽게 들어갈 수 있는 특징이 있기에 유전 재조합 기술에 사용됩니다. 간단한 실험 순서를 소개하도록 하겠습니다. a. Bacteria cell들을 EP tube에 Pellet으로 만들고, P1 buffer 250μl를 넣고 resuspension 시켜줍니다. ( ㄴ..

학과 실험 수업 중 배운 내용 및 이론, 결과값 분석 등에 걸친 내용들을 기록하며 스스로 공부하는데에 목적이 있습니다. 앞으로 포스팅 할 게시글에서 오류가 있다면 댓글로 남겨주시면 정말 정말 감사하겠습니다! 생명과학실험: 동물,식물,미생물 등 생명과학 전 분야에 관련된 기초 및 응용에 관한 다양한 기초실험을 익히는데 목표가 있다. 포스팅 할 순서는 아래와 같습니다. 1. DNA purification 2. Real time PCR 3. Making buffer solution 4. Quantification of DNA and protein 5. Cell counting 6. Western blot 7. Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) 8. Lugol's stai..